ABSTRACT.The objective of this study was the optimization and implementation of a reliable and economical molecular screening method for the detection of the mutant allele of CVM (complex vertebral malformation, c.559G>T, SLC35A3) by HRM analysis, as well as analyzing its existence in a representative sample of Holstein cows from the Milk Genomic DNA Bank of Uruguay. The optimization of the HRM methodology in the RotorGene? 6000 equipment (Corbett Life Science, Australia) by amplification of the 79 bp PCR products clearly differentiated the two genotypes: homozygous, wild type: GG; and heterozygous, carrier for the mutation CVM: GT (c.559G>T; SLC35A3). In the analyzed sample, the frequency of the mutant allele (T) for CVM was high (q= 0.032), with a prevalence of carrier cows of 6.45%. It is concluded that the PCR-HRM analysis is a fast, easily interpretable, low cost, and highly accurate technique for the detection of this mutation in Holstein cattle, which may be implemented in genetic selection programs.RESUMO.O objetivo deste estudo foi otimizar e implementar um sistema fiável e econômico para a detecção molecular do alelo mutante CVM (malformação vertebral complexa; c.559G>T; SLC35A3) por meio da análise HRM, assim como analisar sua presença em uma amostrarepresentativa devacas Holandesasdo Banco de ADN do Instituto Nacional de Pesquisa Agropecuária de Uruguai. A otimização da metodologia HRM no equipamento RotorGene?6000 (Corbett Life Science, Austrália) através da amplificação dos produtos de PCR de 79 pb permitiu diferenciar os dois genótipos: ohomozigoto de tipo salvagem (GG) e o heterozigoto que presenta a mutação CVM (GT). Verificou-se que a frequência do alelo mutante (T) para CVM na amostra analisada foi alta, de q= 0,032, enquanto que a prevalência de vacas portadoras da mutação foi 6,45%. Concluiu-se que a análise por PCR-HRM é uma técnica rápida, facilmente interpretável, de baixo custo e alta precisão para a detecção dessa mutação no gado Holandês, que poderia ser implementada em programas de seleção genética.