El objetivo de este trabajo fue evaluar la prevalencia mensual y su evolución a lo largo de un año, de mastitis subclínica (MSC), en dos tambos comerciales ubicados en la cuenca lechera del Uruguay (Sur) e identificar y caracterizar cepas de Staphylococcus aureus asociados a ella obtenidos de la leche de vacas afectadas que mostraran trazas, 1, 2 o 3 de California Mastitis Test (CMT). Fueron ensayados los tests de coagulasa, hemólisis, la presencia de la cápsula, la formación de limo, la producción de biofilm, la autoagregación, la hemaglutinación y la susceptibilidad a los antibióticos en las cepas de S. aureus aisladas. La prevalencia de la MSC a lo largo del estudio fue baja y no se correlacionó con los meses o las variables climáticas. El número de S. aureus aislados (20) de 508 muestras de leche fue menor que lo descripto en informes de otros autores y corresponde al 3,93% de las mismas. La mayoría de ellos se obtuvieron a partir de muestras que presentaron una untuación de resultado de la prueba de CMT de 1. La formación de cápsula, limo, biofilms y la autoagregación convergen en la capacidad de adherencia bacteriana y la posibilidad de persistencia en la glándula mamaria y probablemente contribuyen a la cronicidad de la infección e incluso la colonización de las instalaciones y equipo de ordeño del tambo. La resistencia antimicrobiana encontrada con respecto a un conjunto de antibióticos comúnmente utilizados en los establecimientos fue baja. La evaluación de factores de virulencia de los aislamientos de S. aureus en el contexto de la MSC en los establecimientos lecheros pueden ser útiles para el desarrollo de acciones precisas y tratamientos para el control de la mastitis y mejorar la salud animal y la producción de leche en los rodeos lecheros bovinos.