El control de las enfermedades infecciosas presenta un desafío continuo, y en dicho control, una de las estrategias más utilizadas es el tratamiento antimicrobiano. Las infecciones hospitalarias aumentan las tasas de morbi-mortalidad de los pacientes, el tiempo de hospitalización y elevan los costos asociados a cuidados de salud. Dentro de los microorganismos aislados de infecciones nosocomiales, se destacan los bacilos Gram negativos que causan infecciones severas tanto a nivel comunitario como hospitalario. En este sentido, la OMS generó una lista de microorganismos a priorizar en la investigación y desarrollo de nuevos antimicrobianos. En esta lista, los Enterobacterales resistentes a cefalosporinas de tercera generación y/o carbapenemes están entre los microorganismos de máximo interés. El principal mecanismo de resistencia en estos microorganismos a carbapenemes es la producción de enzimas carbapenemasas. Los objetivos de este trabajo fueron caracterizar enterobacterias productoras de carbapenemasas a nivel clínico de distintos centros de salud del país. Se realizó una caracterización fenotípica y genotípica de los distintos mecanismos de resistencia a antibióticos (RAM). Se caracterizaron los clones circulantes, secuenciotipos involucrados y la movilidad de los genes de RAM. Se estudiaron aislamientos de Escherichia coli (N=11), Klebsiella pneumoniae (N=63) aislados en 2019 bajo el programa de vigilancia de cepas productoras de carbapenemasas del Ministerio de Salud Pública. Se identificaron en E. coli ocho blaNDM-1, cuatro blaKPC-2 y en K. pneumoniae 43 blaNDM-1, 20 blaKPC-2 y una blaOXA-48. Dos cepas, una de E. coli y una de K. pneumoniae, presentaron doble carbapenemasa (blaNDM-1 + blaKPC-2). El 11% de las cepas presentaron resistencia a colistina (todas ellas identificadas K. pneumoniae, sin la identificación de genes mcr) y el 5% a fosfomicina (principalmente en E. coli, mediado por fosA3), y 1% resistencia a aminoglucósidos (una E. coli, mediado por rmtC). En la caracterización de clones se encontró una gran diversidad en K. pneumoniae donde se detectaron 36 pulsotipos, con un pulsotipo mayoritario con ocho aislamientos. El secuenciotipo ST258 de K. pneumoniae se identificó en el 21% de los casos. En E. coli se encontraron seis pulsotipos y el pulsotipo mayoritario agrupaba cuatro aislamientos. El ST69 de E. coli se identificó en el 27% de las cepas. En los ensayos de movilidad de genes codificantes de carbapenemasas se encontró que el 81% se localizaban en plásmidos conjugativos (tamaño plasmídico, entre 55 y 670 Kb). Se destaca el rol principal de la carbapenemasa codificada por blaNDM-1 y la elevada presencia de este gen en plásmidos conjugativos. Se remarca la importancia de continuar con la vigilancia epidemiológica para conocer los mecanismos de resistencia circulantes y así poder optimizar los recursos terapéuticos disponibles.