La resistencia a antimicrobianos (RAM) constituye una de las principales amenazas para la salud pública, con implicancias directas en la medicina humana, veterinaria y ambiental. Las cefalosporinas de tercera generación (C3G) se encuentran entre los antibióticos de importancia crítica para la medicina humana según la OMS, y su eficacia se ve comprometida por la producción de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) y cefalosporinasas tipo AmpC. En Uruguay, se han reportado enterobacterias productoras de BLEE (blaCTX-M-15, blaCTX-M-55, blaCTX-M-2, blaCTX-M-8, blaCTX-M-14) y AmpC (blaCMY-2) en aislamientos de humanos, caninos, aves, cerdos, bovinos y equinos, aunque no existían antecedentes publicados en felinos a nivel nacional. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la presencia y caracterizar los mecanismos de resistencia a C3G en Escherichia coli aisladas de gatos atendidos en el Hospital de la Facultad de Veterinaria (UdelaR). Se muestrearon 50 gatos mediante hisopados rectales (julio - noviembre 2023). Los aislamientos resistentes a ceftriaxona fueron identificados por MALDI-TOF y evaluados mediante antibiograma y pruebas de sinergia. Se realizó la búsqueda de genes de resistencia (blaCTX-M, blaCMY, qnr) mediante PCR, y la evaluación de la movilidad de los mismos mediante ensayos de conjugación. Se detectaron E. coli resistentes a C3G en 15/50 gatos (30%), de los cuales la mayoría (13/15) se encontraba bajo tratamiento antibiótico. Se observó resistencia concomitante a múltiples antimicrobianos, incluidas fluoroquinolonas, aminoglucósidos y tetraciclinas. Once aislamientos presentaron sinergia positiva para BLEE y cuatro para AmpC. Mediante PCR se identificaron blaCTX-M-grupo1 (5/11), blaCTXM- grupo2 (3/11), blaCTX-M-grupo8 (3/11) y blaCMY (4/4). Cuatro cepas portaron genes qnr en combinación con genes de BLEE. En 12/15 aislamientos se confirmó la transferencia de genes de RAM por conjugación. Estos hallazgos evidencian la circulación de genes de resistencia transferibles en E. coli de gatos en Uruguay. Dado el estrecho vínculo de los felinos con los humanos, la presencia de BLEE, AmpC y genes de resistencia a quinolonas con capacidad de diseminación reafirma la importancia de monitorear a los animales de compañía bajo el enfoque de “Una Salud”.