El botulismo es una enfermedad causada por las neurotoxinas de la bacteria Clostridium botulinum, consideradas como las sustancias tóxicas de mayor potencia dentro de las actualmente conocidas. Esta enfermedad es poco frecuente, pero al mismo tiempo potencialmente letal, tratable y prevenible. Consecuentemente, un correcto diagnóstico es imprescindible para aplicar las medidas terapéuticas adecuadas y mejorar el pronóstico del paciente. El método empleado más ampliamente para la detección de las toxinas ha sido el Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas (ELISA), que utiliza anticuerpos convencionales específicos. No obstante, estas moléculas presentan algunas desventajas que han limitado su potencial para determinadas aplicaciones, dado que su obtención es compleja e implica elevados costos, y su gran tamaño reduce la sensibilidad y estabilidad. En los últimos años, se han estudiado y comenzado a utilizar otras moléculas de unión al antígeno, más pequeñas y versátiles, que presentan algunas ventajas sobre los anticuerpos convencionales como los nanobodies. Los nanobodies o VHHs son uno de los fragmentos de reconocimiento de antígeno más pequeños que se conocen, comprenden únicamente la región variable de la cadena pesada de los anticuerpos de camélidos. Gracias a su facilidad de manipulación mediante biología molecular y otras ventajas estructurales y funcionales, se presentan como una prometedora alternativa a los anticuerpos convencionales para numerosas aplicaciones biotecnológicas, como herramienta de investigación, diagnóstico y terapia. En este trabajo, se desarrolló por primera vez en el laboratorio una estrategia para la obtención de VHHs específicos contra las neurotoxinas botulínicas A (BoNT A) y B (BoNT B) a partir de secuencias obtenidas de una biblioteca de fagos derivada de una llama inmunizada con estos antígenos. Se evaluó su expresión recombinante a diferentes escalas, con diferentes vectores plasmídicos (pET-28a y pBAD/HisA) en de Escherichia coli. Estos VHHs podrían ser potencialmente beneficiosos para el desarrollo de reactivos recombinantes para la detección rápida de las toxinas botulínicas, para mejorar el diagnóstico y tratamiento del botulismo. Además, esta estrategia podría ser extensible a otras moléculas o blancos de interés.