Los requerimientos de glucosa en el período de lactancia temprana en las vacas se ven fuertemente elevados con el fin de alcanzar los niveles de producción de leche. Por este motivo se considera relevante el estudio de la producción de glucosa en vacas lecheras de alta producción y el posible impacto de dos dietas. Se estudiaron veinticuatro vacas multíparas Holstein-Friesian asignadas en un diseño de bloques al azar a dos tratamientos: (TMR) alimentadas con dieta totalmente mezclada ad libitum, o (Pas) pastoreo más suplemento de 0 a 180 días posparto (DPP). En este trabajo se presenta información sobre la expresión y regulación de la gluconeogénesis durante la curva de lactancia en vacas con distintas estrategias de alimentación. Se determinaron los niveles de glucosa libre y glucógeno hepático, y sus cambios asociados a los requerimientos energéticos. Se estudió la fosforilación de la AMPK y se realizó una aproximación a nivel molecular sobre los cambios en la expresión de enzimas involucradas en la gluconeogénesis, y su relación con la vía de señalizaciónde AMPK. En relación a esto último se presentó información inédita para este modelo, tanto con lo que sucede a nivel upstream o de activación de la vía, como con lo que sucede a nivel downstream y su impacto en la vía gluconeogénica.