Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas

Saravia Silvera, Evangelina - Vila Varela, Delfina

Resumen:

En el siguiente trabajo final de carrera se expresan dos enzimas terapéuticas claves para el tratamiento del cáncer: la CD y la UPRT, en cuatro cepas de expresión diferentes provenientes de Escherichia coli. Estas dos enzimas se presentan como candidatos terapéuticos para desarrollar estrategias dirigidas a sitios específicos en el cuerpo afectados por el cáncer, para poder así aumentar la efectividad y reducir los efectos adversos. Recientes avances en genómica, proteómica y biología molecular han permitido la expresión de proteínas heterólogas en sistemas biológicos. La cepa bacteriana Escherichia coli se destaca como un sistema de expresión, debido al amplio conocimiento con respecto a su metabolismo, fisiología y genética, así como a la gran variedad disponible de vectores para la producción de proteínas recombinantes con costos reducidos y alta eficiencia. La evaluación de estas permitió identificar a la cepa BL21(DE3) como el mejor sistema de expresión para escalar satisfactoriamente la expresión. Las proteínas terapéuticas presentaron un elevado grado de pureza, mayor a 90%, luego de dos pasos cromatográficos que incluyeron una cromatografía de afinidad por quelatos metálicos y una cromatografía de exclusión molecular. Además, se colectó información novedosa con respecto a la conformación oligomérica en solución de las enzimas. Finalmente, en esta tesis se generaron inmovilizados activos conteniendo una variante mejorada de CD, CD_S126R, por atrapamiento en sílica biomimética. Los mismos presentaron un porcentaje de inmovilización y rendimiento del 96% y 55%, respectivamente. Los datos recuperados resultan alentadores para continuar avanzando hacia una estrategia terapéutica combinada, basada en el par CD/UPRT.


Detalles Bibliográficos
2024
PROYECTOS-BI
CÁNCER
PROTEÍNA RECOMBINANTE
NANOPARTÍCULAS DE SÍLICA
BIOMEDICINA
INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS
Español
Universidad ORT Uruguay
RAD
https://hdl.handle.net/20.500.11968/7013
http://hdl.handle.net/20.500.11968/7013
Acceso abierto
Acceso abierto
_version_ 1807261355935268864
author Saravia Silvera, Evangelina
author2 Vila Varela, Delfina
author2_role author
author_facet Saravia Silvera, Evangelina
Vila Varela, Delfina
author_role author
bitstream.checksum.fl_str_mv 0d592c0ad77935a3a2e41f89033e12e2
054b9a6fce5dd4620776ed42c9e1a1a0
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
bitstream.url.fl_str_mv https://rad.ort.edu.uy/bitstreams/612da82d-7497-43dc-8770-31b70abb6d01/download
https://rad.ort.edu.uy/bitstreams/423cd8ff-ea22-4383-a3c9-a26a983d579c/download
collection RAD
dc.contributor.advisor.none.fl_str_mv Ortiz Carrión, Cecilia Carolina
dc.contributor.tribunal.none.fl_str_mv Jackson Carvalho, Erienne
Pirotti Corrales, Florencia Daniela
dc.creator.none.fl_str_mv Saravia Silvera, Evangelina
Vila Varela, Delfina
dc.date.accessioned.none.fl_str_mv 2024-07-11T18:37:24Z
dc.date.available.none.fl_str_mv 2024-07-11T18:37:24Z
dc.date.issued.none.fl_str_mv 2024
dc.description.abstract.none.fl_txt_mv En el siguiente trabajo final de carrera se expresan dos enzimas terapéuticas claves para el tratamiento del cáncer: la CD y la UPRT, en cuatro cepas de expresión diferentes provenientes de Escherichia coli. Estas dos enzimas se presentan como candidatos terapéuticos para desarrollar estrategias dirigidas a sitios específicos en el cuerpo afectados por el cáncer, para poder así aumentar la efectividad y reducir los efectos adversos. Recientes avances en genómica, proteómica y biología molecular han permitido la expresión de proteínas heterólogas en sistemas biológicos. La cepa bacteriana Escherichia coli se destaca como un sistema de expresión, debido al amplio conocimiento con respecto a su metabolismo, fisiología y genética, así como a la gran variedad disponible de vectores para la producción de proteínas recombinantes con costos reducidos y alta eficiencia. La evaluación de estas permitió identificar a la cepa BL21(DE3) como el mejor sistema de expresión para escalar satisfactoriamente la expresión. Las proteínas terapéuticas presentaron un elevado grado de pureza, mayor a 90%, luego de dos pasos cromatográficos que incluyeron una cromatografía de afinidad por quelatos metálicos y una cromatografía de exclusión molecular. Además, se colectó información novedosa con respecto a la conformación oligomérica en solución de las enzimas. Finalmente, en esta tesis se generaron inmovilizados activos conteniendo una variante mejorada de CD, CD_S126R, por atrapamiento en sílica biomimética. Los mismos presentaron un porcentaje de inmovilización y rendimiento del 96% y 55%, respectivamente. Los datos recuperados resultan alentadores para continuar avanzando hacia una estrategia terapéutica combinada, basada en el par CD/UPRT.
dc.format.extent.none.fl_str_mv 111 p. diagrs., fot., tbls., grafs.
dc.format.mimetype.none.fl_str_mv PDF
dc.identifier.citation.none.fl_str_mv Saravia Silvera, E. & Vila Varela, D. (2024). Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas (Trabajo final de carrera). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/7013
dc.identifier.uri.none.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.11968/7013
http://hdl.handle.net/20.500.11968/7013
dc.language.iso.none.fl_str_mv spa
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidad ORT Uruguay
dc.relation.other.none.fl_str_mv https://sisbibliotecas.ort.edu.uy/bib/95872
dc.rights.license.none.fl_str_mv Acceso abierto
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.source.none.fl_str_mv reponame:RAD
instname:Universidad ORT Uruguay
instacron:Universidad ORT
dc.subject.none.fl_str_mv PROYECTOS-BI
CÁNCER
PROTEÍNA RECOMBINANTE
NANOPARTÍCULAS DE SÍLICA
BIOMEDICINA
INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS
dc.title.none.fl_str_mv Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
dc.type.none.fl_str_mv Trabajo final de carrera
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
dc.type.version.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
description En el siguiente trabajo final de carrera se expresan dos enzimas terapéuticas claves para el tratamiento del cáncer: la CD y la UPRT, en cuatro cepas de expresión diferentes provenientes de Escherichia coli. Estas dos enzimas se presentan como candidatos terapéuticos para desarrollar estrategias dirigidas a sitios específicos en el cuerpo afectados por el cáncer, para poder así aumentar la efectividad y reducir los efectos adversos. Recientes avances en genómica, proteómica y biología molecular han permitido la expresión de proteínas heterólogas en sistemas biológicos. La cepa bacteriana Escherichia coli se destaca como un sistema de expresión, debido al amplio conocimiento con respecto a su metabolismo, fisiología y genética, así como a la gran variedad disponible de vectores para la producción de proteínas recombinantes con costos reducidos y alta eficiencia. La evaluación de estas permitió identificar a la cepa BL21(DE3) como el mejor sistema de expresión para escalar satisfactoriamente la expresión. Las proteínas terapéuticas presentaron un elevado grado de pureza, mayor a 90%, luego de dos pasos cromatográficos que incluyeron una cromatografía de afinidad por quelatos metálicos y una cromatografía de exclusión molecular. Además, se colectó información novedosa con respecto a la conformación oligomérica en solución de las enzimas. Finalmente, en esta tesis se generaron inmovilizados activos conteniendo una variante mejorada de CD, CD_S126R, por atrapamiento en sílica biomimética. Los mismos presentaron un porcentaje de inmovilización y rendimiento del 96% y 55%, respectivamente. Los datos recuperados resultan alentadores para continuar avanzando hacia una estrategia terapéutica combinada, basada en el par CD/UPRT.
eu_rights_str_mv openAccess
format bachelorThesis
id RAD_73f29a0ce47ae9f97c205cdb8d85448d
identifier_str_mv Saravia Silvera, E. & Vila Varela, D. (2024). Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas (Trabajo final de carrera). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/7013
instacron_str Universidad ORT
institution Universidad ORT
instname_str Universidad ORT Uruguay
language spa
network_acronym_str RAD
network_name_str RAD
oai_identifier_str oai:rad.ort.edu.uy:20.500.11968/7013
publishDate 2024
publisher.none.fl_str_mv Universidad ORT Uruguay
reponame_str RAD
repository.mail.fl_str_mv rodriguez_v@ort.edu.uy
repository.name.fl_str_mv RAD - Universidad ORT Uruguay
repository_id_str 3927
rights_invalid_str_mv Acceso abierto
spelling Ortiz Carrión, Cecilia CarolinaJackson Carvalho, EriennePirotti Corrales, Florencia DanielaSaravia Silvera, EvangelinaVila Varela, Delfina2024-07-11T18:37:24Z2024-07-11T18:37:24Z2024En el siguiente trabajo final de carrera se expresan dos enzimas terapéuticas claves para el tratamiento del cáncer: la CD y la UPRT, en cuatro cepas de expresión diferentes provenientes de Escherichia coli. Estas dos enzimas se presentan como candidatos terapéuticos para desarrollar estrategias dirigidas a sitios específicos en el cuerpo afectados por el cáncer, para poder así aumentar la efectividad y reducir los efectos adversos. Recientes avances en genómica, proteómica y biología molecular han permitido la expresión de proteínas heterólogas en sistemas biológicos. La cepa bacteriana Escherichia coli se destaca como un sistema de expresión, debido al amplio conocimiento con respecto a su metabolismo, fisiología y genética, así como a la gran variedad disponible de vectores para la producción de proteínas recombinantes con costos reducidos y alta eficiencia. La evaluación de estas permitió identificar a la cepa BL21(DE3) como el mejor sistema de expresión para escalar satisfactoriamente la expresión. Las proteínas terapéuticas presentaron un elevado grado de pureza, mayor a 90%, luego de dos pasos cromatográficos que incluyeron una cromatografía de afinidad por quelatos metálicos y una cromatografía de exclusión molecular. Además, se colectó información novedosa con respecto a la conformación oligomérica en solución de las enzimas. Finalmente, en esta tesis se generaron inmovilizados activos conteniendo una variante mejorada de CD, CD_S126R, por atrapamiento en sílica biomimética. Los mismos presentaron un porcentaje de inmovilización y rendimiento del 96% y 55%, respectivamente. Los datos recuperados resultan alentadores para continuar avanzando hacia una estrategia terapéutica combinada, basada en el par CD/UPRT.111 p. diagrs., fot., tbls., grafs.PDFSaravia Silvera, E. & Vila Varela, D. (2024). Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas (Trabajo final de carrera). Universidad ORT Uruguay, Facultad de Ingeniería. Recuperado de https://rad.ort.edu.uy/handle/20.500.11968/7013https://hdl.handle.net/20.500.11968/7013http://hdl.handle.net/20.500.11968/7013spaUniversidad ORT Uruguayhttps://sisbibliotecas.ort.edu.uy/bib/95872info:eu-repo/semantics/openAccessAcceso abiertoPROYECTOS-BICÁNCERPROTEÍNA RECOMBINANTENANOPARTÍCULAS DE SÍLICABIOMEDICINAINMOVILIZACIÓN DE ENZIMASBioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículasTrabajo final de carrerainfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionreponame:RADinstname:Universidad ORT Uruguayinstacron:Universidad ORTFi - Ingeniería en Biotecnología - BIFacultad de IngenieríaCarrera universitariaIngeniero en BiotecnologíaTrabajo final de carreraTrabajo final de carrera (Carrera Universitaria). Universidad ORT Uruguay, Facultad de IngenieríaORIGINALMaterial completo.pdfdescriptionapplication/pdf3359953https://rad.ort.edu.uy/bitstreams/612da82d-7497-43dc-8770-31b70abb6d01/download0d592c0ad77935a3a2e41f89033e12e2MD51THUMBNAILMaterial completo.pdf.jpgMaterial completo.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2707https://rad.ort.edu.uy/bitstreams/423cd8ff-ea22-4383-a3c9-a26a983d579c/download054b9a6fce5dd4620776ed42c9e1a1a0MD5220.500.11968/70132024-07-22 15:37:33.044oai:rad.ort.edu.uy:20.500.11968/7013https://rad.ort.edu.uyUniversidadhttps://www.ort.edu.uy/https://rad.ort.edu.uy/server/oai/requestrodriguez_v@ort.edu.uyUruguayopendoar:39272024-07-22T15:37:33RAD - Universidad ORT Uruguayfalse
spellingShingle Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
Saravia Silvera, Evangelina
PROYECTOS-BI
CÁNCER
PROTEÍNA RECOMBINANTE
NANOPARTÍCULAS DE SÍLICA
BIOMEDICINA
INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS
status_str publishedVersion
title Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
title_full Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
title_fullStr Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
title_full_unstemmed Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
title_short Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
title_sort Bioproducción de enzimas terapéuticas para su incorporación en nanopartículas
topic PROYECTOS-BI
CÁNCER
PROTEÍNA RECOMBINANTE
NANOPARTÍCULAS DE SÍLICA
BIOMEDICINA
INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS
url https://hdl.handle.net/20.500.11968/7013
http://hdl.handle.net/20.500.11968/7013