El biodiesel es un combustible obtenido a partir de fuentes renovables, siendo el glicerol uno de los principales subproductos. La producción de biodiesel conlleva un alto costo, por lo cual mitigar los costos de producción y comercialización de estos compuestos es mejorar la ecuación económica de la industria del biodiesel. En este trabajo de grado se estudia la biotransformación de glicerol utilizando células en reposo de “Gluconobacter frateurii”, una cepa (bacteria) productora de ácido glicérico (GA) y dihidroxiacetona (DHA). Se buscó optimizar el crecimiento de la bacteria para la generación de inóculos y sus reacciones de conversión, reduciendo costos y mejorando la productividad del ácido glicérico. Se optimizaron los parámetros del proceso de crecimiento a distintas escalas demostrándose que es posible reducir en un 70% la concentración de glicerol utilizada en la generación de inóculos para las reacciones de conversión. Además,se estudiaron herramientas genéticas en una enzima involucrada en la producción de ácido glicérico (GA). Como conclusión se obtiene una cepa recombinante de “Gluconobacter frateurii” NBRC103465 capaz de crecer en kanamicina con el plásmido de expresión pBBR-adhS, resultado del cual no existían precedentes al momento de la finalización de este trabajo. Los resultados obtenidos constituyen un valioso aporte a la biotransformación de glicerol en productos de valor agregado por G. frateurii, con especial énfasis en ácido glicérico.