Los antibióticos son utilizados en los tambos para el tratamiento y prevención de enfermedades en ganado bovino lechero, como la mastitis, cojera, infecciones respiratorias y diarrea. Los más usados pertenecen al grupo de los betalactámicos (penicilinas y cefalosporinas), tetraciclinas, macrólidos, quinolonas y sulfamidas. Los residuos de antibióticos pueden generar problemas en la población en forma de alergias y resistencia antimicrobiana, así como en la industria y el medio ambiente. Existen reglamentaciones nacionales e internacionales que prohíben el procesamiento de leche con antibióticos, por lo que es de importancia el estudio de alternativas para su disposición. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto del tratamiento con β-lactamasa (BL) y peroxidasa de rábano (HRP), en la degradación de penicilina G (PG) y oxitetraciclina (OTC) en leche. Los ensayos se realizaron en leche en polvo descremada contaminada con tres concentraciones de antibiótico: 6, 12 y 30 ppb PG; y 12, 24 y 60 ppb OTC. Se probaron tres concentraciones de BL (0.1, 0.5 y 1.0 mU/mL) y dos de HRP (4.0 y 8.0 U/mL). Se extrajeron muestras a las 3, 6, 9, 12 y 24 horas para detección de antibióticos mediante el inmunoensayo semicuantitativo Charm DIP MRL Beta-lactamasas y Tetraciclinas (CharmSciences Inc.). Los resultados obtenidos indican que en tres horas 1 mU/ mL de BL degradó por lo menos un 90% de la PG presente en la leche con 30 ppb. La HRP en una concentración de 8 U/mL degradó por lo menos un 90% de OTC presente en la leche con 60 ppb, en 24 horas. Con 4 U/mL de HRP más de 75% de OTC fue degradado en 12 horas. Las enzimas estudiadas presentan un alto potencial para degradar antibióticos en leche. Estos datos son una base para optimizar la metodología, cuantificando el contenido de antibióticos por HPLC/MS-MS.