Dada la emergencia y reemergencia de arbovirus como el virus Mayaro (MAYV) en la región y la presencia de su principal vector a nivel urbano, el mosquito Aedes aegypti, Uruguay se encuentra en riesgo constante. Consecuentemente, urge hallar estrategias de atenuación de estos virus con el fin de generar nuevas estrategias antivirales. A diferencia de los arbovirus, los virus que únicamente infectan mosquitos presentan genomas con altas frecuencias relativas del di-nucleótido CpG. Además, se ha reportado que el incremento de la frecuencia de este di-nucleótido puede activar eficientemente la respuesta inmune en vertebrados, lo cual explica su sub-representación en virus ARN que infectan solamente vertebrados. En este trabajo se abordó una estrategia de atenuación viral mediante mutaciones sinónimas, basada en ingeniería genética y biología sintética, con el objetivo de generar cepas de MAYV con altas frecuencias de CpGs que dificulten su replicación en células de mamífero. Se partió de un clon infeccioso wild type (WT) y se diseñaron tres clones mutantes de MAYV, aumentando sus frecuencias de CpGs en: toda la región codificante (FG+), exclusivamente en la región no estructural (NS+) y exclusivamente en la región estructural (S+). Se compararon las cinéticas de replicación viral en células A549 a alta y baja multiplicidad de infección. Los virus mutantes presentaron títulos virales menores al virus WT, llegando a diferencias de más de un orden de magnitud en el caso de FG+. En conclusión, el aumento en CpGs dificulta la replicación de MAYV en células A549, generando un fenotipo atenuado.