Caracterización funcional y silenciamiento in vivo de lncRNAs mediante oligonucleótidos antisentido (ASOs) en testículo de ratón (RECIBIÓ PREMIO A MEJOR PRESENTACIÓN ORAL)

de los Santos, Eliana - Rodríguez-Casuriaga, Rosana - Geisinger, Adriana

Resumen:

Los ARN largos no codificantes (lncRNAs) son transcritos de más de 200 nucleótidos que tienen un bajo o nulo potencial para codificar proteínas. Aproximadamente el 40% de los lncRNAs son intergénicos, mientras que el 60% restante se solapa o se encuentra adyacente a genes codificantes de proteínas. La función biológica de la mayoría de los lncRNAs, en especial los de tipo antisentido, ha sido poco estudiada debido a limitaciones técnicas. Las estrategias actuales de eliminación de expresión de lncRNAs basadas en CRISPR son eficaces para aquellos que están alejados de genes codificantes, pero no son aplicables a la mayoría de los lncRNAs, ya que pueden interferir con los genes adyacentes o solapantes. Por otra parte, los métodos de silenciamiento mediado por ARNs interferentes (siRNAs) actúan mediante la vía de los miRNAs, por lo cual suelen permitir el silenciamiento de ARNs citoplásmicos, siendo poco eficientes para silenciar a nivel del núcleo. Dadas las limitaciones mencionadas, nuestro objetivo fue desarrollar una técnica de silenciamiento (knock-down) in vivo de lncRNAs mediante microinyecciones testiculares basada en el uso de oligonucleótidos antisentido (ASOs) modificados. Ello implicó la puesta a punto de un mecanismo de delivery de estos lncRNAs vía microinyección a través de la rete testis. En este trabajo, se busca realizar la caracterización funcional de Kcnmb4os1, un lncRNA cuyo locus se ubica de forma solapante y antisentido del gen codificante Kcnmb4, codificante para la subunidad beta-4 de un canal de potasio activado por calcio. Por su localización determinada por FISH, este lncRNA se localiza en el núcleo de las células en profase meiótica en estrecha relación con los cromosomas homólogos apareados, y podría estar vinculado a la búsqueda de homologías durante la meiosis. Hasta el momento hemos logrado un silenciamiento de Kcnmb4os1 superior al 50%. El desarrollo de esta metodología representa un importante hito ya que permitirá la caracterización funcional de lncRNAs in vivo en un sistema tan complejo como el testículo. A su vez, la metodología podría ser aplicable al estudio funcional de lncRNAs antisentido en otros órganos y tejidos.

Detalles Bibliográficos
2024
Agencia Nacional de Investigación e Innovación
meiosis
lncRNAs
silenciamiento génico
Ciencias Naturales y Exactas
Ciencias Biológicas
Biología Reproductiva
Bioquímica y Biología Molecular
Español
Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable
IIBCE en REDI
https://hdl.handle.net/20.500.12381/5521
Acceso abierto
Reconocimiento 4.0 Internacional. (CC BY)
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