Listeria monocytogenes es el agente causal de la enfermedad grave listeriosis. Dado que la caracterización de cepas en circulación es importante para las investigaciones epidemiológicas, el objetivo de este trabajo consistió en caracterizar seis aislamientos de L. monocytogenes identificados como L100A1 y L101B2 provenientes de carne vacuna, L200 y L201 de carne de cerdo y P20 y P24 de carne aviar. Se identificaron sus serotipos mediante métodos moleculares y se estudió su capacidad de formar biofilms y la resistencia de los mismos frente al ácido láctico (1 % durante 5 min) mediante el ensayo en placas de microtitulación a 37 °C y 20 °C. Además, se analizó la secuencia del gen de la Internalina A para identificar la presencia de mutaciones de codón de terminación prematura, factor que puede disminuir su virulencia y favorecer su persistencia en el ambiente. Durante el estudio se utilizaron como referencia las cepas ATCC® 19111, ATCC® 13932 y dos cepas donadas por el Instituto de Higiene (CC1/2b y CC1/2c). Se determinó que los aislamientos L100A1, L200 y L201 pertenecen al serotipo 4b; L101B2 y P24 pertenecen al serotipo 1/2a y P20 al 1/2b. Los aislamientos estudiados pertenecen a los serotipos comúnmente hallados en alimentos y casos clínicos y presentaron diferente capacidad para formar biofilms. L101B2 y P20 formaron biofilm a 37 °C y 20°C, mientras que L200 y L201 formaron biofilm solo a 20 °C. El biofilm formado por la cepa L200 a 20°C fue el único significativamente (p < 0,05) sensible al ácido láctico. La resistencia de los biofilms al ácido láctico puede ser preocupante ya que el ácido láctico es utilizado actualmente como antimicrobiano en la industria cárnica. A su vez los seis aislamientos tienen la secuencia completa de la Internalina A la cual se asocia con su potencial patogénico.