Desarrollo de nuevos agentes para imagenología molecular para diagnóstico de cáncer de mama y próstata
Supervisor(es): Cabral, Pablo - Camacho, Ximena Aida
Resumen:
Se desarrollaron exitosamente dos radiotrazadores basados en un análogo del péptido LHRH (LHRH(D-Lys6)): el [99mTc]Tc-HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) /Tricina/Ácido Nicotínico (NA) y el [68Ga]Ga-DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6), ambos con una pureza radioquímica superior al 94%. Ambos demostraron alta estabilidad en condiciones in vitro (PBS, suero fetal bovino-SFB-) durante al menos 2-4 h, así como resistencia a competidores del radionucleido. Presentaron marcada hidrofilicidad y baja unión a proteínas plasmáticas. La evaluación in vitro, realizada en diversas líneas de cáncer de mama y próstata, junto con controles negativos, mostró una unión significativa de ambos radiofármacos a estas líneas, demostrándose a su vez su especificidad mediante ensayos de bloqueo con el ligando frío. Los estudios in vivo revelaron baja actividad en tiroides y estómago, indicando una reoxidación insignificante, con excreción principalmente renal y baja actividad en sangre. Las biodistribuciones en ratones portadores de tumores demostraron una acumulación preferencial del trazador a nivel tumoral, con una relación Tumor/Músculo mayor a 5 para ambos compuestos. Los ensayos imagenológicos por PET/CT y SPECT/CT confirmaron la visibilidad del tumor en todos los modelos estudiados. Asimismo, se logró sintetizar un tercer radiofármaco, el [99mTc]Tc-HYNIC-Trastuzumab con una pureza radioquímica superior al 90%. Este demostró estabilidad in vitro en NaCl 0.9%, SFB y competidores hasta 24 h post-marcación. La evaluación in vivo en líneas de cáncer de próstata, mediante unión celular y citometría de flujo, mostró una sobreexpresión moderada a alta del receptor HER2 en las líneas celulares evaluadas hasta 4 h, siendo esta específica. Las biodistribuciones evidenciaron una alta captación en sangre y bazo, conforme a las características de estas moléculas de alto peso molecular. Los ensayos de imagenología SPECT/CT revelaron tumores visibles para los modelos de cáncer de próstata evaluados ( LnCap y PC3) hasta 24 h post inyección. En resumen, se han desarrollado tres innovadores radiofármacos para el diagnóstico imagenológico de cáncer de mama y próstata, siendo los resultados obtenidos altamente prometedores. No obstante, se requiere ampliar los estudios para continuar la caracterización de los complejos.
2024 | |
Imageneología molecular LHRH Hormona liberadora de hormona luteinizante Cáncer Cáncer de próstata Cáncer de mama SPECT/CT PET/CT |
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Español | |
Universidad de la República | |
COLIBRI | |
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Acceso abierto | |
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dc.description.tableofcontents.es.fl_txt_mv | Abreviaturas – 1-Introducción – 1 - Cáncer -- 1.1 Cáncer de mama -- 1.1.1 Epidemiologia -- 1.1.2 Clasificación -- 1.1.3 Fisiopatología y Mecanismos moleculares -- 1.1.4 Diagnóstico -- 1.1.5 Tratamiento -- 1.1.6 Rol de la Medicina Nuclear en diagnóstico -- 1.2 Cáncer de Próstata -- 1.2.1 Epidemiologia -- 1.2.2 Clasificación -- 1.2.3 Fisiopatología y mecanismos moleculares -- 1.2.4 Diagnóstico -- 1.2.5 Tratamiento -- 1.2.6 Rol de la Medicina Nuclear en CaP – 2-LHRH -- 2.1: Funciones endógenas del decapéptido LHRH -- 2.2 LHRH en cáncer -- 2.3 Estrategias terapéuticas basadas en el LHRH -- 2.4 LHRH Como agente de imagenología -- 3. EGFRs -- 3.1 Ligandos de la familia -- 3.2 Rol de los EGFRs en el Cáncer -- 3.3 Trastuzumab como ligando de HER2 -- 3.4: Trastuzumab en CaP -- 4-Imagenología Molecular -- 4.1 Principios básicos de SPECT -- 4.2 Principios básicos de PET -- 4.3 Agentes de imagenología molecular -- 4.3.1 Anticuerpos monoclonales como agentes de imagen -- 4.3.2 Péptidos como agentes de imagen -- 5-Radiofármacos -- 5.1 Radiofármacos de diagnóstico -- 5.1.1 Tecnecio-99m -- 5.1.2 Radiofármacos de 99mTc -- 5.1.3 Estrategias de marcación con 99mTc -- 5.1.4 HYNIC como agente quelante bifuncional -- 5.2 Galio 68 -- 5.2.1 Marcación con 68Ga -- 5.2.3 Radiofármacos de 68Ga -- 5.2.4 DOTA como agente quelante Bifuncional – 2-Objetivos -- 2.1: Objetivo general -- 2.2: Objetivos específicos -- 3-Generación Radiofármaco de 99mTc basado en el péptido HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) -- 3.1 Materiales y Métodos -- 3.1.1 Síntesis de péptido HYNIC-LHRH(D-Lys6)-GSG -- 3.1 2. Marcación del péptido con [ 99mTc]TcO4- -- 3.1.3 Purificación de los complejos [99mTc]Tc--HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) /Coligando -- 3.1.4 Coeficiente de reparto o Log P -- 3.1.5 Estabilidad in vitro -- 3.1.6 Modelos celulares -- 3.1.7 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 3.1.8 Modelos in vivo -- 3.1.9 Imágenes SPECT/CT -- 3.2 Resultados y Discusión -- 3.2.1 Síntesis de HYNIC-GSG-LHRH -- 3.2.2 Marcación con 99mTc de HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) -- 3.2.3 Coeficiente de Reparto o log P -- 3.2.4 Estabilidad in vitro -- 3.2.5-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de mama -- 3.2.6-Estudios biodistribución en ratones hembra normales y xenográficos (4T1) -- 3.2.7-Estudios SPECT/CT en ratones hembra xenográficos (4T1, BT-474, MCF-7) -- 3.2.8-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de próstata -- 3.2.9-Estudios biodistribución en ratones macho normales y xenográficos (LnCap, PC3) -- 3.2.10-Estudios imagenológicos SPECT/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) -- 3.3 Conclusiones -- 4-Generación Radiofármaco de 68Ga basado en el péptido Ahx-DOTA-LHRH(D-Lys6) -- 4.1 Materiales y Métodos -- 4.1.1 Síntesis del péptido DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) -- 4.1 2. Marcación del péptido con [ 68Ga]GaCl3 -- 4.1.3 Purificación del radiofármaco [68Ga]Ga-DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) -- 4.1.4 Coeficiente de reparto o Log P -- 4.1.5 Estabilidad in vitro -- 4.1.6 Modelos celulares -- 4.1.7 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 4.1.8 Modelos in vivo -- 4.1.9 Imágenes PET/CT -- 4.2 Resultados y Discusión -- 4.2.1 Síntesis del precursor -- 4.2.2 Marcación del DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) con [ 68Ga]GaCl3 -- 4.2.3 Coeficiente de Reparto o log P -- 4.2.4 Estabilidad in vitro -- 4.2.5-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de mama -- 4.2.6-Estudios biodistribución en ratones hembra normales y xenográficos (4T1) -- 4.2.7-Estudios PET/CT en ratones hembra xenográficos (4T1) -- 4.2.8-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de próstata -- 4.2.9-Estudios biodistribución en ratones macho normales y xenográficos (LnCap, PC3) -- 4.2.10-Estudios PET/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) -- 4.3 Conclusiones -- 5-Generación Radiofármaco de 99mTc basado en el anticuerpo Trastuzumab (Herceptin) -- 5.1 Materiales y Métodos -- 5.1.1 Conjugación HYNIC-Trastuzumab -- 5.1.2 Marcación con 99mTc de Tfa-HYNIC-Trastuzumab y controles de calidad -- 5.1.3. Estabilidad de estabilidad in vitro del complejo [99mTc]Tc-HYNIC-Trastuzumab -- 5.2.4 Conjugación de Trastuzumab con isotiocianato de fluoresceína (FITC) -- 5.2.5 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 5.2.6 Análisis por citometría de flujo -- 5.2.7 Modelos in vivo -- 5.2.8 Imágenes de modelos SPECT/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) y ratones Nude hembras portadores de tumores (MCF-7, BT-474) -- 5.2 Resultados y Discusión -- 5.1.1 Conjugación HYNIC-Trastuzumab -- 5.2.2 Marcación con [99mTc]TcO4- de Tfa-HYNIC-Trastuzumab y controles de calidad -- 5.2.3. Estabilidad de estabilidad in vitro del complejo [99mTc]Tc—HYNIC-Trastuzumab -- 5.3.4 Conjugación de Trastuzumab con isotiocianato de fluoresceína (FITC) -- 5.3.5 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 5.3.6 Análisis por citometría de flujo -- 5.3.7 Modelos in vivo -- 5.3.8 Imágenes SPECT/CT -- 5.3 Conclusiones -- 6-Conclusiones finales -- 7-Perspectivas a futuro -- 8-Producción bibliográfica durante el período del Doctorado -- Anexos -- Bibliografía |
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No obstante, se requiere ampliar los estudios para continuar la caracterización de los complejos.Submitted by Suhr Deborah (dsuhr@fq.edu.uy) on 2024-11-15T17:05:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 25790 bytes, checksum: 13adb202270a5f7cee03e795b33133c4 (MD5) TD Alfaya.pdf: 5779509 bytes, checksum: 7c791aa1c1f8f163be5d35dc4a395efa (MD5)Made available in DSpace by Luna Fabiana (fabiana.luna@seciu.edu.uy) on 2024-11-15T17:29:23Z (GMT). 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EGFRs -- 3.1 Ligandos de la familia -- 3.2 Rol de los EGFRs en el Cáncer -- 3.3 Trastuzumab como ligando de HER2 -- 3.4: Trastuzumab en CaP -- 4-Imagenología Molecular -- 4.1 Principios básicos de SPECT -- 4.2 Principios básicos de PET -- 4.3 Agentes de imagenología molecular -- 4.3.1 Anticuerpos monoclonales como agentes de imagen -- 4.3.2 Péptidos como agentes de imagen -- 5-Radiofármacos -- 5.1 Radiofármacos de diagnóstico -- 5.1.1 Tecnecio-99m -- 5.1.2 Radiofármacos de 99mTc -- 5.1.3 Estrategias de marcación con 99mTc -- 5.1.4 HYNIC como agente quelante bifuncional -- 5.2 Galio 68 -- 5.2.1 Marcación con 68Ga -- 5.2.3 Radiofármacos de 68Ga -- 5.2.4 DOTA como agente quelante Bifuncional – 2-Objetivos -- 2.1: Objetivo general -- 2.2: Objetivos específicos -- 3-Generación Radiofármaco de 99mTc basado en el péptido HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) -- 3.1 Materiales y Métodos -- 3.1.1 Síntesis de péptido HYNIC-LHRH(D-Lys6)-GSG -- 3.1 2. Marcación del péptido con [ 99mTc]TcO4- -- 3.1.3 Purificación de los complejos [99mTc]Tc--HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) /Coligando -- 3.1.4 Coeficiente de reparto o Log P -- 3.1.5 Estabilidad in vitro -- 3.1.6 Modelos celulares -- 3.1.7 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 3.1.8 Modelos in vivo -- 3.1.9 Imágenes SPECT/CT -- 3.2 Resultados y Discusión -- 3.2.1 Síntesis de HYNIC-GSG-LHRH -- 3.2.2 Marcación con 99mTc de HYNIC-GSG-LHRH(D-Lys6) -- 3.2.3 Coeficiente de Reparto o log P -- 3.2.4 Estabilidad in vitro -- 3.2.5-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de mama -- 3.2.6-Estudios biodistribución en ratones hembra normales y xenográficos (4T1) -- 3.2.7-Estudios SPECT/CT en ratones hembra xenográficos (4T1, BT-474, MCF-7) -- 3.2.8-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de próstata -- 3.2.9-Estudios biodistribución en ratones macho normales y xenográficos (LnCap, PC3) -- 3.2.10-Estudios imagenológicos SPECT/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) -- 3.3 Conclusiones -- 4-Generación Radiofármaco de 68Ga basado en el péptido Ahx-DOTA-LHRH(D-Lys6) -- 4.1 Materiales y Métodos -- 4.1.1 Síntesis del péptido DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) -- 4.1 2. Marcación del péptido con [ 68Ga]GaCl3 -- 4.1.3 Purificación del radiofármaco [68Ga]Ga-DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) -- 4.1.4 Coeficiente de reparto o Log P -- 4.1.5 Estabilidad in vitro -- 4.1.6 Modelos celulares -- 4.1.7 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 4.1.8 Modelos in vivo -- 4.1.9 Imágenes PET/CT -- 4.2 Resultados y Discusión -- 4.2.1 Síntesis del precursor -- 4.2.2 Marcación del DOTA-Ahx-LHRH(D-Lys6) con [ 68Ga]GaCl3 -- 4.2.3 Coeficiente de Reparto o log P -- 4.2.4 Estabilidad in vitro -- 4.2.5-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de mama -- 4.2.6-Estudios biodistribución en ratones hembra normales y xenográficos (4T1) -- 4.2.7-Estudios PET/CT en ratones hembra xenográficos (4T1) -- 4.2.8-Estudios biológicos in vitro de unión celular en líneas de cáncer de próstata -- 4.2.9-Estudios biodistribución en ratones macho normales y xenográficos (LnCap, PC3) -- 4.2.10-Estudios PET/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) -- 4.3 Conclusiones -- 5-Generación Radiofármaco de 99mTc basado en el anticuerpo Trastuzumab (Herceptin) -- 5.1 Materiales y Métodos -- 5.1.1 Conjugación HYNIC-Trastuzumab -- 5.1.2 Marcación con 99mTc de Tfa-HYNIC-Trastuzumab y controles de calidad -- 5.1.3. Estabilidad de estabilidad in vitro del complejo [99mTc]Tc-HYNIC-Trastuzumab -- 5.2.4 Conjugación de Trastuzumab con isotiocianato de fluoresceína (FITC) -- 5.2.5 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 5.2.6 Análisis por citometría de flujo -- 5.2.7 Modelos in vivo -- 5.2.8 Imágenes de modelos SPECT/CT en ratones macho Nude portadores de tumores (LnCap, PC3) y ratones Nude hembras portadores de tumores (MCF-7, BT-474) -- 5.2 Resultados y Discusión -- 5.1.1 Conjugación HYNIC-Trastuzumab -- 5.2.2 Marcación con [99mTc]TcO4- de Tfa-HYNIC-Trastuzumab y controles de calidad -- 5.2.3. Estabilidad de estabilidad in vitro del complejo [99mTc]Tc—HYNIC-Trastuzumab -- 5.3.4 Conjugación de Trastuzumab con isotiocianato de fluoresceína (FITC) -- 5.3.5 Estudios biológicos in vitro de unión celular -- 5.3.6 Análisis por citometría de flujo -- 5.3.7 Modelos in vivo -- 5.3.8 Imágenes SPECT/CT -- 5.3 Conclusiones -- 6-Conclusiones finales -- 7-Perspectivas a futuro -- 8-Producción bibliográfica durante el período del Doctorado -- Anexos -- Bibliografía247 p.application/pdfesspaUdelar. FQ : PEDECIBALas obras depositadas en el Repositorio se rigen por la Ordenanza de los Derechos de la Propiedad Intelectual de la Universidad de la República.(Res. Nº 91 de C.D.C. de 8/III/1994 – D.O. 7/IV/1994) y por la Ordenanza del Repositorio Abierto de la Universidad de la República (Res. Nº 16 de C.D.C. de 07/10/2014)An error occurred getting the license - uri.info:eu-repo/semantics/openAccessLicencia Creative Commons Atribución - No Comercial - Sin Derivadas (CC - By-NC-ND 4.0)Imageneología molecularLHRHHormona liberadora de hormona luteinizanteCáncerCáncer de próstataCáncer de mamaSPECT/CTPET/CTDesarrollo de nuevos agentes para imagenología molecular para diagnóstico de cáncer de mama y próstataTesis de doctoradoinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/acceptedVersionreponame:COLIBRIinstname:Universidad de la Repúblicainstacron:Universidad de la RepúblicaAlfaya Bianchi, LucíaCabral, PabloCamacho, Ximena AidaUniversidad de la República (Uruguay). Facultad de QuímicaDoctor en QuímicaLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-84267http://localhost:8080/xmlui/bitstream/20.500.12008/47098/5/license.txt6429389a7df7277b72b7924fdc7d47a9MD55CC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; charset=utf-850http://localhost:8080/xmlui/bitstream/20.500.12008/47098/2/license_urla006180e3f5b2ad0b88185d14284c0e0MD52license_textlicense_texttext/html; charset=utf-829577http://localhost:8080/xmlui/bitstream/20.500.12008/47098/3/license_textba914616aeadf0866ee4b578c21f24d6MD53license_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-825790http://localhost:8080/xmlui/bitstream/20.500.12008/47098/4/license_rdf13adb202270a5f7cee03e795b33133c4MD54ORIGINALTD Alfaya.pdfTD Alfaya.pdfapplication/pdf5779509http://localhost:8080/xmlui/bitstream/20.500.12008/47098/1/TD+Alfaya.pdf7c791aa1c1f8f163be5d35dc4a395efaMD5120.500.12008/470982024-11-15 14:29:23.852oai:colibri.udelar.edu.uy:20.500.12008/47098VGVybWlub3MgeSBjb25kaWNpb25lcyByZWxhdGl2YXMgYWwgZGVwb3NpdG8gZGUgb2JyYXMKCgpMYXMgb2JyYXMgZGVwb3NpdGFkYXMgZW4gZWwgUmVwb3NpdG9yaW8gc2UgcmlnZW4gcG9yIGxhIE9yZGVuYW56YSBkZSBsb3MgRGVyZWNob3MgZGUgbGEgUHJvcGllZGFkIEludGVsZWN0dWFsICBkZSBsYSBVbml2ZXJzaWRhZCBEZSBMYSBSZXDDumJsaWNhLiAoUmVzLiBOwrogOTEgZGUgQy5ELkMuIGRlIDgvSUlJLzE5OTQg4oCTIEQuTy4gNy9JVi8xOTk0KSB5ICBwb3IgbGEgT3JkZW5hbnphIGRlbCBSZXBvc2l0b3JpbyBBYmllcnRvIGRlIGxhIFVuaXZlcnNpZGFkIGRlIGxhIFJlcMO6YmxpY2EgKFJlcy4gTsK6IDE2IGRlIEMuRC5DLiBkZSAwNy8xMC8yMDE0KS4gCgpBY2VwdGFuZG8gZWwgYXV0b3IgZXN0b3MgdMOpcm1pbm9zIHkgY29uZGljaW9uZXMgZGUgZGVww7NzaXRvIGVuIENPTElCUkksIGxhIFVuaXZlcnNpZGFkIGRlIFJlcMO6YmxpY2EgcHJvY2VkZXLDoSBhOiAgCgphKSBhcmNoaXZhciBtw6FzIGRlIHVuYSBjb3BpYSBkZSBsYSBvYnJhIGVuIGxvcyBzZXJ2aWRvcmVzIGRlIGxhIFVuaXZlcnNpZGFkIGEgbG9zIGVmZWN0b3MgZGUgZ2FyYW50aXphciBhY2Nlc28sIHNlZ3VyaWRhZCB5IHByZXNlcnZhY2nDs24KYikgY29udmVydGlyIGxhIG9icmEgYSBvdHJvcyBmb3JtYXRvcyBzaSBmdWVyYSBuZWNlc2FyaW8gIHBhcmEgZmFjaWxpdGFyIHN1IHByZXNlcnZhY2nDs24geSBhY2Nlc2liaWxpZGFkIHNpbiBhbHRlcmFyIHN1IGNvbnRlbmlkby4KYykgcmVhbGl6YXIgbGEgY29tdW5pY2FjacOzbiBww7pibGljYSB5IGRpc3BvbmVyIGVsIGFjY2VzbyBsaWJyZSB5IGdyYXR1aXRvIGEgdHJhdsOpcyBkZSBJbnRlcm5ldCBtZWRpYW50ZSBsYSBwdWJsaWNhY2nDs24gZGUgbGEgb2JyYSBiYWpvIGxhIGxpY2VuY2lhIENyZWF0aXZlIENvbW1vbnMgc2VsZWNjaW9uYWRhIHBvciBlbCBwcm9waW8gYXV0b3IuCgoKRW4gY2FzbyBxdWUgZWwgYXV0b3IgaGF5YSBkaWZ1bmRpZG8geSBkYWRvIGEgcHVibGljaWRhZCBhIGxhIG9icmEgZW4gZm9ybWEgcHJldmlhLCAgcG9kcsOhIHNvbGljaXRhciB1biBwZXLDrW9kbyBkZSBlbWJhcmdvIHNvYnJlIGxhIGRpc3BvbmliaWxpZGFkIHDDumJsaWNhIGRlIGxhIG1pc21hLCBlbCBjdWFsIGNvbWVuemFyw6EgYSBwYXJ0aXIgZGUgbGEgYWNlcHRhY2nDs24gZGUgZXN0ZSBkb2N1bWVudG8geSBoYXN0YSBsYSBmZWNoYSBxdWUgaW5kaXF1ZSAuCgpFbCBhdXRvciBhc2VndXJhIHF1ZSBsYSBvYnJhIG5vIGluZnJpZ2UgbmluZ8O6biBkZXJlY2hvIHNvYnJlIHRlcmNlcm9zLCB5YSBzZWEgZGUgcHJvcGllZGFkIGludGVsZWN0dWFsIG8gY3VhbHF1aWVyIG90cm8uCgpFbCBhdXRvciBnYXJhbnRpemEgcXVlIHNpIGVsIGRvY3VtZW50byBjb250aWVuZSBtYXRlcmlhbGVzIGRlIGxvcyBjdWFsZXMgbm8gdGllbmUgbG9zIGRlcmVjaG9zIGRlIGF1dG9yLCAgaGEgb2J0ZW5pZG8gZWwgcGVybWlzbyBkZWwgcHJvcGlldGFyaW8gZGUgbG9zIGRlcmVjaG9zIGRlIGF1dG9yLCB5IHF1ZSBlc2UgbWF0ZXJpYWwgY3V5b3MgZGVyZWNob3Mgc29uIGRlIHRlcmNlcm9zIGVzdMOhIGNsYXJhbWVudGUgaWRlbnRpZmljYWRvIHkgcmVjb25vY2lkbyBlbiBlbCB0ZXh0byBvIGNvbnRlbmlkbyBkZWwgZG9jdW1lbnRvIGRlcG9zaXRhZG8gZW4gZWwgUmVwb3NpdG9yaW8uCgpFbiBvYnJhcyBkZSBhdXRvcsOtYSBtw7psdGlwbGUgL3NlIHByZXN1bWUvIHF1ZSBlbCBhdXRvciBkZXBvc2l0YW50ZSBkZWNsYXJhIHF1ZSBoYSByZWNhYmFkbyBlbCBjb25zZW50aW1pZW50byBkZSB0b2RvcyBsb3MgYXV0b3JlcyBwYXJhIHB1YmxpY2FybGEgZW4gZWwgUmVwb3NpdG9yaW8sIHNpZW5kbyDDqXN0ZSBlbCDDum5pY28gcmVzcG9uc2FibGUgZnJlbnRlIGEgY3VhbHF1aWVyIHRpcG8gZGUgcmVjbGFtYWNpw7NuIGRlIGxvcyBvdHJvcyBjb2F1dG9yZXMuCgpFbCBhdXRvciBzZXLDoSByZXNwb25zYWJsZSBkZWwgY29udGVuaWRvIGRlIGxvcyBkb2N1bWVudG9zIHF1ZSBkZXBvc2l0YS4gTGEgVURFTEFSIG5vIHNlcsOhIHJlc3BvbnNhYmxlIHBvciBsYXMgZXZlbnR1YWxlcyB2aW9sYWNpb25lcyBhbCBkZXJlY2hvIGRlIHByb3BpZWRhZCBpbnRlbGVjdHVhbCBlbiBxdWUgcHVlZGEgaW5jdXJyaXIgZWwgYXV0b3IuCgpBbnRlIGN1YWxxdWllciBkZW51bmNpYSBkZSB2aW9sYWNpw7NuIGRlIGRlcmVjaG9zIGRlIHByb3BpZWRhZCBpbnRlbGVjdHVhbCwgbGEgVURFTEFSICBhZG9wdGFyw6EgdG9kYXMgbGFzIG1lZGlkYXMgbmVjZXNhcmlhcyBwYXJhIGV2aXRhciBsYSBjb250aW51YWNpw7NuIGRlIGRpY2hhIGluZnJhY2Npw7NuLCBsYXMgcXVlIHBvZHLDoW4gaW5jbHVpciBlbCByZXRpcm8gZGVsIGFjY2VzbyBhIGxvcyBjb250ZW5pZG9zIHkvbyBtZXRhZGF0b3MgZGVsIGRvY3VtZW50byByZXNwZWN0aXZvLgoKTGEgb2JyYSBzZSBwb25kcsOhIGEgZGlzcG9zaWNpw7NuIGRlbCBww7pibGljbyBhIHRyYXbDqXMgZGUgbGFzIGxpY2VuY2lhcyBDcmVhdGl2ZSBDb21tb25zLCBlbCBhdXRvciBwb2Ryw6Egc2VsZWNjaW9uYXIgdW5hIGRlIGxhcyA2IGxpY2VuY2lhcyBkaXNwb25pYmxlczoKCgpBdHJpYnVjacOzbiAoQ0MgLSBCeSk6IFBlcm1pdGUgdXNhciBsYSBvYnJhIHkgZ2VuZXJhciBvYnJhcyBkZXJpdmFkYXMsIGluY2x1c28gY29uIGZpbmVzIGNvbWVyY2lhbGVzLCBzaWVtcHJlIHF1ZSBzZSByZWNvbm96Y2EgYWwgYXV0b3IuCgpBdHJpYnVjacOzbiDigJMgQ29tcGFydGlyIElndWFsIChDQyAtIEJ5LVNBKTogUGVybWl0ZSB1c2FyIGxhIG9icmEgeSBnZW5lcmFyIG9icmFzIGRlcml2YWRhcywgaW5jbHVzbyBjb24gZmluZXMgY29tZXJjaWFsZXMsIHBlcm8gbGEgZGlzdHJpYnVjacOzbiBkZSBsYXMgb2JyYXMgZGVyaXZhZGFzIGRlYmUgaGFjZXJzZSBtZWRpYW50ZSB1bmEgbGljZW5jaWEgaWTDqW50aWNhIGEgbGEgZGUgbGEgb2JyYSBvcmlnaW5hbCwgcmVjb25vY2llbmRvIGEgbG9zIGF1dG9yZXMuCgpBdHJpYnVjacOzbiDigJMgTm8gQ29tZXJjaWFsIChDQyAtIEJ5LU5DKTogUGVybWl0ZSB1c2FyIGxhIG9icmEgeSBnZW5lcmFyIG9icmFzIGRlcml2YWRhcywgc2llbXByZSB5IGN1YW5kbyBlc29zIHVzb3Mgbm8gdGVuZ2FuIGZpbmVzIGNvbWVyY2lhbGVzLCByZWNvbm9jaWVuZG8gYWwgYXV0b3IuCgpBdHJpYnVjacOzbiDigJMgU2luIERlcml2YWRhcyAoQ0MgLSBCeS1ORCk6IFBlcm1pdGUgZWwgdXNvIGRlIGxhIG9icmEsIGluY2x1c28gY29uIGZpbmVzIGNvbWVyY2lhbGVzLCBwZXJvIG5vIHNlIHBlcm1pdGUgZ2VuZXJhciBvYnJhcyBkZXJpdmFkYXMsIGRlYmllbmRvIHJlY29ub2NlciBhbCBhdXRvci4KCkF0cmlidWNpw7NuIOKAkyBObyBDb21lcmNpYWwg4oCTIENvbXBhcnRpciBJZ3VhbCAoQ0Mg4oCTIEJ5LU5DLVNBKTogUGVybWl0ZSB1c2FyIGxhIG9icmEgeSBnZW5lcmFyIG9icmFzIGRlcml2YWRhcywgc2llbXByZSB5IGN1YW5kbyBlc29zIHVzb3Mgbm8gdGVuZ2FuIGZpbmVzIGNvbWVyY2lhbGVzIHkgbGEgZGlzdHJpYnVjacOzbiBkZSBsYXMgb2JyYXMgZGVyaXZhZGFzIHNlIGhhZ2EgbWVkaWFudGUgbGljZW5jaWEgaWTDqW50aWNhIGEgbGEgZGUgbGEgb2JyYSBvcmlnaW5hbCwgcmVjb25vY2llbmRvIGEgbG9zIGF1dG9yZXMuCgpBdHJpYnVjacOzbiDigJMgTm8gQ29tZXJjaWFsIOKAkyBTaW4gRGVyaXZh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