En Uruguay, donde el 70 % de la leche se exporta, la sostenibilidad ambiental es clave para favorecer la competitividad del sector lácteo. Frente a este desafío, se promueven estrategias que reduzcan emisiones de gases de efecto invernadero, como el uso de raciones parcialmente mezcladas (RPM), que combinan pasturas con raciones totalmente mezcladas (RTM). Estas dietas disminuyen los costos, mejoran el bienestar animal y reducen el impacto ambiental. En este sentido, el estudio del ecosistema ruminal es fundamental para optimizar la productividad y mitigar las emisiones de metano.El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de sustituir el 40% de una ración totalmente mezclada para vacas lecheras por alfalfa en estado vegetativo medio o botón temprano sobre la degradabilidad de nutrientes, la microbiota, el ambiente ruminal y las emisiones de metano en un sistema de rumen artificial (RuSiTec; Rumen Simulation Technique). El experimento fue llevado a cabo en un sistema in vitro de fermentación ruminal con 6 unidades de fermentación donde se incubaron por duplicado tres dietas formuladas para vacas lecheras de alta producción: (1) 60:40 RTM: alfalfa en estado vegetativo medio (RPM1); (2) 60:40 RTM: alfalfa en botón temprano (RPM2); (3) 100:0 RTM (control), en tres corridas de 14 días (7 días para equilibrar el sistema, y 7 días de muestreo). Los datos se analizaron utilizando modelos mixtos, con la corrida como efecto aleatorio y el tratamiento y el día de muestreo, cuando se utilizaron medidas repetidas, como efectos fijos. Se compararon las medias utilizando contrastes ortogonales preplanificados (RPMs vs RTM y RPM1 vs RPM2). La desaparición de la materia orgánica (dMO) y de la fibra detergente neutro (dFDN) en la dieta RTM fue de 52,4% y 34,3%, respectivamente, valores superiores a los observados en las dietas RPM (dMO=50,4% y dFDN=29,0%). El pH ruminal fue más alto en la dieta RPM2 (6,65) en comparación con RPM1 (6,55) y RTM (6,53), a pesar de que no se observaron diferencias en la producción total de ácidos grasos volátiles (AGVs) entre dietas. La proporción de ácido propiónico fue mayor en la dieta RTM respecto a las RPMs (28,8% vs. 26,8%). Por su parte, la dieta RPM1 presentó una mayor proporción de ácido butírico que RTM y RPM2 (9,72% vs. 9,01% y 9,05%, respectivamente). Además, la producción de metano no se afectó por la dieta. Por otra parte, la sustitución parcial de una dieta RTM por alfalfa modificó tanto la estructura como la diversidad de la comunidad microbiana ruminal. Particularmente se observó en las dietas parcialmente mezcladas una disminución en la abundancia de Prevotella spp. y Succinivibro spp., géneros productores de propionato, y un aumento en la de Lactobacillus spp. y Streptococcus spp., géneros que proliferan generalmente durante la acidosis, respecto a la dieta control. Por otro lado, la abundancia relativa de arqueas no se vio afectada por la dieta. En conclusión, la sustitución parcial de ración totalmente mezclada por alfalfa no afectó la producción de metano, aunque sí modificó positivamente el pH ruminal, especialmente con alfalfa en botón temprano. No obstante, esta estrategia disminuyó la degradabilidad de los nutrientes y promovió cambios en la microbiota ruminal asociados a un mayor riesgo de acidosis. Por lo tanto, la implementación de estas raciones mixtas requiere una cuidadosa optimización para equilibrar sus beneficios en el ambiente ruminal manteniendo la eficiencia digestiva.