Las células madre mesenquimales (CMM) presentan características atractivas para su uso terapéutico, como multipotencialidad, inmunomodulación, angiogenicidad, migran al foco inflamatorio (homing) y antimicrobianas. Es importante profundizar sobre sus características in vitro para poder optimizar su potencial terapéutico en estudios preclínico (modelo animal) y en medicina veterinaria. El objetivo del presente trabajo fue evaluar las diferencias de las CMM caninas derivadas de tejido adiposo (TA) de las fuentes subcutánea (SC) y visceral (VS) en relación a su habilidad de proliferación, immunofenotipificación y multipotencialidad in vitro. Fue estudiada la habilidad de proliferación de CMM-TA SC y VS de caninos en bajos pasajes (P0-P3). Para caracterizar las CMM fueron inmunofenotipificadas y tridiferenciadas in vitro. Se evaluó la variación de la plasticidad de diferenciación in vitro, de la capacidad de sintetizar matriz ósea in vitro y de los marcadores antigénicos de superficie, en diferentes pasajes (P4, P6 y P8). En el P0 presentaron similar habilidad proliferativa en ambas fuentes de TA. En cambio, se observó una alta capacidad proliferativa de las CMM-TA SC en P1-P3 comparado con la fuente VS. Las CMM-TA de ambas fuentes presentaron los marcadores CD44+, CD90+ y no el CD45-. Fue posible tridiferenciar in vitro (adiposo, cartilaginoso y óseo) para ambos linajes. La CMM-TA SC preserva su multipotencialidad in vitro hasta el P8, en cambio la fuente VS hasta el P4. Además, la fuente SC presenta mayor capacidad de síntesis de matriz ósea in vitro. En conclusión, la fuente SC posee ventajas sobre la VS, debido a que las CMM-TA presentan mayor habilidad proliferativa, preservan su plasticidad in vitro mayor número de pasajes, tiene mayor capacidad de sintetizar matriz ósea in vitro y su extracción es menos invasiva. Describimos por primera vez un método alternativo para evaluar la habilidad proliferativa de las CMM-TA, determinando tiempo y cantidad final de células cosechadas. Nuevas investigaciones deberían ser abordadas para evaluar sí las diferencias in vitro se mantiene in vivo cuando son aplicadas las CMM-TA con fines terapéuticos.