Las aflatoxinas son de las micotoxinas más estudiadas debido a los perjuicios que causan en la salud humana y animal. Se conocen 20 tipos de aflatoxinas; la aflatoxina B1 (AFB1) es considerada la de mayor importancia, debido a su carcinogenicidad y a que uno de sus metabolitos, la aflatoxina M1 (AFM1) es eliminado en la leche de vacas que consumen AFB1. Es a través de esta que la AFM1 puede llegar a los humanos. Considerando el riesgo de exposición a alimentos contaminados con aflatoxinas para humanos y animales, se han establecido límites máximos de detección permitidos. Entre las técnicas más difundidas para detectar aflatoxinas está la técnica de ELISA. El objetivo de la presente tesis es evaluar la utilización de un kit comercial de ELISA para detectar AFM1 en orina de vacas lecheras en producción, alimentadas artificialmente con niveles predeterminados de AFB1 con y sin agregado de secuestrante. Doce vacas lecheras en producción, se bloquearon y distribuyeron en tres grupos de cuatro vacas cada uno. Los tratamientos administrados fueron: grupo 1 alimento libre de AFB1 y de secuestrante (grupo control); grupo 2 alimento contaminado con AFB1 y grupo 3 alimento contaminado con AFB1 y secuestrante comercial de aflatoxinas. El ensayo tuvo una duración total de 18 días. A partir del día 1 se obtuvieron por masaje vulvar muestras de orina individual diariamente a todos los animales experimentales. A todas las vacas lecheras que consumieron alimento contaminado artificialmente con AFB1 se les detectó AFM1 mediante la utilización del Kit comercial de Elisa. El perfil de eliminación de AFM1 entre vacas que consumieron AFB1 (grupo 2) y vacas que además se les administró secuestrante de aflatoxinas (grupo 3) fue similar (P>0.05, Test Student). La medición de AFM1 en orina demostró ser de valor diagnóstico no sólo por las ventajas de la técnica (sensible, económica, rápida) y de la facilidad del muestreo, sino por la versatilidad de su empleo en animales no productores de leche.