El objetivo de este trabajo fue determinar cómo afecta el cambio de alimentación desde un sistema mixto (doble pastoreo y dieta totalmente mezclada: DTM) hacia un sistema en estabulación con 100% DTM y desde el sistema mixto (doble pastoreo más DTM) hacia un solo pastoreo nocturno más DTM sobre las variables productivas y el perfil de ácidos grasos (PAG) en leche. Los tratamientos fueron: vacas en confinamiento alimentadas con 100% DTM (ad libitum) durante todo el período experimental (GDTM: grupo dieta total mezclada, n = 15); vacas que cambiaron bruscamente de un doble pastoreo más DTM a confinamiento (100% DTM) (GCD: grupo cambio de dieta, n = 15); y vacas que cambiaron de un doble pastoreo más DTM a un solo pastoreo nocturno más DTM (GDTM+P: grupo dieta total mezclada más pastura, n = 15). Los cambios de manejo y alimentación fueron realizados en el segundo mes de lactación. Para la evaluación de la producción de leche, proteína, lactosa y grasa (kg/d y porcentaje) se tomaron muestras de leche individuales con una frecuencia semanal. Las muestras de leche y alimento para la evaluación del PAG fueron tomadas un mes antes (M1) y un mes después (M3) del cambio en los sistemas mixtos. La producción de leche fue mayor para GDTM en la semana 9 en comparación con GCD y GDTM+P (p = 0,0006 y p = 0,007 respectivamente). En las semanas 12 y 13 GCD no tuvo diferencias con GDTM, pero GCD fue mayor que GDTM+P (p = 0,01 y p = 0,002). La producción de proteína y lactosa (kg/d) siguió la misma tendencia que la producción de leche (p= 0,001). En relación a la producción de grasa (kg/d), el tratamiento GCD aumentó luego del cambio, desde la semana 9 a la 10 (p = 0,004) y se mantuvo constante hasta la semana 13, mientras que el GDTM+P disminuyó desde la semana 4 a la 13 (p = 0,005). El C18:2 CLA, omega-3 y la relación omega-6/omega-3 mostraron interacción entre tratamiento-mes (p = 0,02). Para el C18:2 CLA, todos los tratamientos disminuyeron en M3 respecto a M1, pero el tratamiento GDTM+P no presentó una caída tan grande, siendo mayor que el GCD (p = 0,001). Los omega-3 (n-3) no tuvieron diferencias entre tratamientos en M1. Sin embargo, GCD disminuyó desde M1 a M3 (p = 0.0001) y fue menor que GDTM+P en M3 (p = 0,02). La relación omega-6/omega-3 (n-6/n-3) en GDTM fue superior a GCD y GDTM+P en M1 (p < 0,0001), mientras que en M3 GDTM y GCD tuvieron mayor relación que GDTM+P (p < 0,0001). El cambio de un sistema mixto a un sistema estabulado en GCD influyó positivamente en las variables productivas, pero hubo una disminución de algunos AG considerables saludables. Sin embargo, el tratamiento que mantuvo un pastoreo nocturno mejoró el PAG saludables en detrimento de la producción de leche.