La Green Fluorescent Protein (GFP) es una proteína presente en la medusa Aequorea victoria que se ha estudiado extensamente por sus características espectroscópicas, estructurales y su aplicación como sonda en modelos celulares. Se expresa la sfGFP recombinante en su forma wt y su mutante sfGFP150 que presenta en la posición 150 de la estructura primaria un codón stop UAG en la secuencia. A través del uso de un par tRNA sintetasa y tRNA, seleccionados específicamente para cargar en el codón stop UAG residuos de 3-nitrotirosina se prepara una proteína nitrada en forma sitio específica. La incorporación de 3-nitrotirosina fue comprobada a través de western blot y por espectrometría de masa. Se analizan los espectros de excitación y emisión de la GFP mononitrada (GFP150) y se comparan con la wt. Se estudia la estabilidad térmica y frente a agentes desnaturalizante de ambas proteínas GFP150 y wt.