La cetosis es una de las patologías más prevalentes en los rodeos lecheros y conlleva a grandes pérdidas económicas, por lo que el diagnóstico temprano es especialmente importante. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar tres herramientas de diagnóstico de cetosis subclínica [tiras reactivas en orina Multistix® 10SG (Siemens®, Alemania); espectrometría infrarroja transformada de Fourier (FTIR); y relación grasa:proteína (G:P) de la leche] en vacas Holando, durante los primeros 20 días posparto. El trabajo se realizó en la Unidad de Lechería del Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria, “La Estanzuela”, Uruguay, durante dos años. Se utilizaron 101 vacas multíparas Holando, las cuales fueron evaluadas para el diagnóstico de cetosis subclínica, dos veces por semana desde el parto hasta el día 20 posparto. Se realizó un diagnóstico presuntivo de cetosis subclínica a través de la recolección de muestras de orina y medición de las concentraciones de Acetoacetato (AcAc) con tiras reactivas Multistix® 10SG. Luego de esto, se tomaron muestras de sangre de todos los animales, determinando la concentración de β- hidroxibutirato (BHB) sanguíneo, considerada la prueba de referencia. Durante el ordeñe, previo a la revisión clínica, se obtuvieron muestras de leche para determinación de BHB, grasa y proteína láctea con el método FTIR, y se calculó la relación G:P de la leche. Durante los dos años de evaluación la frecuencia de cetosis clínica fue 8,9% (9/101) y de 49,5% (50/101) para cetosis subclínica. La correlación entre las concentraciones de BHB en sangre y de AcAc en orina fue positiva (r=0,67; P< 0,0001), y se obtuvo una sensibilidad (Se) de 37,8% y una especificidad (Esp) de 94,4% para las tiras Multistix® 10SG. Por otro lado, se encontró una correlación positiva entre las concentraciones de BHB en sangre y BHB en leche (r=0,44; P< 0,0001). Al evaluar dos puntos de corte para la concentración de BHB en leche (≥ 0,07 mmol/L y ≥ 0,10 mmol/L), se obtuvo una Se de 95,9% y Esp de 16,7% para el primer punto de corte; mientras que para el segundo la Se fue de 72,6% y la Esp de 62,1%. El punto de corte óptimo que se calculó en este trabajo para el diagnóstico de cetosis subclínica por el método FTIR en leche fue ≥0,14 mmol/L (Se= 75% y Esp= 60%). Las concentraciones de BHB en sangre se correlacionaron positivamente con el valor de relación G:P (r=0,19; P=0,04) a través de su relación con los % de grasa (r=0,22; P=0,02), no así con los de proteína (r=-0,04; P˂0,10) de la leche. La Se de la relación G:P, para el diagnóstico de cetosis subclínica fue de 94,4% y la Esp de 16,2%. Si bien las tres herramientas evaluadas para diagnóstico de cetosis subclínica se asociaron con el diagnóstico por la prueba de referencia (concentración de BHB en sangre), el método de medición de BHB en leche con FTIR obtuvo un mejor desempeño de diagnóstico que las tiras Multistix® 10SG, detectando mejor a los animales enfermos del rodeo. La utilización de la relación G:P como indicador de cetosis subclínica resultó condicionada al porcentaje de grasa en leche.