La abeja sintetiza, entre otros productos, veneno o también conocido como apitoxina, compuesta químicamente por una compleja mezcla de sustancias bioactivas en la cual su mayor componente es el agua, pero en su base seca presenta una composición mayoritaria de péptidos, proteínas y enzimas, entre otros componentes. La síntesis del veneno es realizada solamente por las abejas hembra, dentro de las cuales quienes presentan un sistema morfo-funcional más desarrollado son las abejas obreras, que por su función recolectora en busca de alimentos, lo producen como defensa ante amenazas. La cantidad de factores condicionantes para la síntesis y composición del veneno de abeja abarcan desde su genética hasta factores ambientales donde encontramos las variaciones climáticas y por ende la disponibilidad del alimento a lo largo del año. También importa la edad de las abejas, presentando etapas de producción y posteriormente el método y manejo de la extracción del veneno. El veneno es de gran interés principalmente por sus usos en la industria farmacéutica y cosmética. Desde la antigüedad este producto ha sido empleado para el tratamiento de diferentes enfermedades, por lo que a lo largo del tiempo se ha profundizado en su investigación, llegando a resultados comprobados para el tratamiento de enfermedades como la artritis reumatoide y el dolor. No obstante, se reportan líneas de investigación que se encuentran en diferentes etapas experimentales con resultados prometedores para otras patologías. Para el uso en las industrias farmacéutica y cosmética, es muy importante conocer la calidad que presenta este principio activo, por lo que se han desarrollaron diversos métodos de identificación y cuantificación de los principales componentes de esta mezcla, encontrando en la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) uno de los métodos de elección por su buena relación costo-calidad. En Uruguay no hay reportes de dichos estudios, pero para la comercialización de este cotizado producto debería empezar a implementarse. En los métodos ya descritos por HPLC se establecen tiempos de análisis de 30-50 minutos, los cuales requieren de una inversión de tiempo significativa, relevante cuando hay grandes cantidades de muestras a procesar. Por lo anterior, en el presente trabajo nos planteamos el desarrollo de un método analítico para cuali-cuantificar muestras de apitoxina con un tiempo menor a lo reportado anteriormente, en el que además se buscó conservar la buena resolución entre los picos referidos a los principales componentes de la apitoxina, como son la melitina, la fosfolipasa A2 y la apamina. Es así que, en este trabajo se reporta el desarrollo de un método con tiempo final de 24 minutos, cumpliendo además con la premisa de conservar la buena resolución entre los picos. Además, se determinaron la linealidad en los rangos de concentración utilizados para estándares de apamina y melitina, y estableciendo también los límites de detección y cuantificación para ambos compuestos, con proyección de continuar evaluando otros parámetros de adecuabilidad del sistema.