El estudio de los efectos alelopáticos constituye una gran herramienta para la comprensión de las relaciones entre especies vegetales, lo cuál sería de gran importancia para el desarrollo de nuevas tecnologías y prácticas de manejo a nivel productivo. La falta de ajustes metodológicos hace que algunos bioensayos de laboratorio no predigan adecuadamente las respuestas observadas a campo. Con el objetivo mayor de contribuir en el conocimiento de los ajustes que permitan mejorar los resultados de los estudios en alelopatía se llevó a cabo el presente trabajo de tesis, que tuvo por objetivo determinar el efecto del sustrato, de la densidad y del estado de desarrollo en la expresión de los efectos alelopáticos en variedades de cebada. A tales fines fueron instalados 4 experimentos en la cámara de crecimiento del laboratorio de malherbología de la Estación Experimental Mario A. Cassinoni de la Facultad de Agronomía durante los meses de junio a agosto del 2014. Todos los experimentos tuvieron Diseño de Bloques Completamente Aleatorizados (DBA) y fueron procesadas a través de Anavas y separación de medias por Test de Tukey cuando correspondiera. En los experimentos 1 y 2 se estudiaron los efectos de los sustratos tierra (T), tierra adicionada con carbón activado (TCA) y tierra esterilizada (TE), sobre la expresión de los efectos aleopáticos de 5 variedades de cebada (Arrayán, Cle 202, Guaviyú, Carumbé y Ambev 23) en la longitud de raíz de Lolium multiflorum (raigrás anual). En el experimento 3 se estudiaron los efectos de 5 relaciones de densidad especie donante cebada /especie receptora raigrás; 10/2, 10/4, 10/6, 10/8 y 10/10, en 2 sustratos (T y TCA) en la expresión de los efectos alelopáticos de las variedades de cebada de mayor y menor potencial alelopático (Ambev 23 y CLE 202). En el experimento 4 se estudiaron los efectos de los momentos de emergencias relativas de cebada y raigrás en la inhibición alelopática sobre la raíz de raigrás. Considerando los resultados de estos experimentos se encontró que el sustrato tierra puede constituir una herramienta útil y sencilla en el estudio de efectos alelopáticos, que las relaciones de densidad especie donante/especie receptora no afectaron la expresión de efectos alelopáticas en las variedades de cebada ensayadas sobre raigrás en el rango de 10/2 a 10/10 estudiado y que el momento de emergencia de cebada en relación a raigrás afectó la magnitud de los efectos alelopáticos expresados por la variedad de cebada ensayada (Ambev 23).